云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测及防控措施

杨仕标  信爱国  赵文华  王金萍  李富祥  胡骑  苗海生

云南省畜牧兽医科学院

云南省热带亚热带动物病毒病重点实验室

（昆明金殿，650224）

摘要：本文报告云南奶（水）牛口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测的结果，并在监测的基础上提出相应的防控措施。2011年度，云南省现代农业（奶牛）产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和奶牛养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。应用口蹄疫A型、亚洲I型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法检测口蹄疫O型阳性数253份，阳性率81.35%；亚洲1型阳性数278份，阳性率89.39%；A型抗体阳性数110份，阳性率35.37%。应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检测检出阳性样品7份，阳性率2.25%。应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检测检出阳性样品2份，阳性率0.64%。针对本次实施的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果，提出了相应的防控措施：强化奶牛和奶水牛犊牛免疫、跟踪监测和完善生物安全措施。

关键词：奶（水）牛；监测；口蹄疫；布什杆菌；防控措施

1. 引言

云南省地处我国西南边疆，具有独特的立体气候条件，奶牛和奶水牛养殖区域处于热带、亚热带、温带等不同的气候带。这种独特的生态环境，使奶牛和奶水牛疫病复杂化。云南与越南、老挝和缅甸等东南亚国家接壤，边境线长达4010公里；由于历史、传统和经济的原因，边境地区存在一定规模的动物及其产品非法贸易，疫病引入的风险极大。云南省水牛存栏259.6万头，其中，能繁母牛82.93万头；水牛数量仅次于广西，居全国第二位，目前在大理、德宏、保山等地区奶水牛存栏约6万头，奶水牛疫病的流行、发生表现出独特的特征。

口蹄疫是一种重要的跨境动物传染病。口蹄疫的发生、流行所造成的经济损失除死亡、处置疫情等直接经济损失外，因消费者消费信心下降所造成的产品消费下降、国际出口贸易限制等是更为重大的经济损失。奶牛布氏杆菌病是重要的人畜共患病之一。近年来，我国人间和畜间布氏杆菌病的发生有明显增加的趋势，我国采取了一系列的防控措施，取得了一定的效果。对口蹄疫和布氏杆菌病实施监测，是制定防控措施的基础，具有重要的现实意义。

根据云南省现代农业（奶牛）产业技术体系奶牛疫病控制功能实验室的任务需要，2011年1月至2月，在体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站各示范场、养殖小区和奶牛养殖户采集奶牛、奶水牛血清样品共计311份。检测奶牛口蹄疫O型、亚洲1型和A型免疫抗体和非结构蛋白3ABC抗体，评估免疫效果和自然感染情况；应用ELISA试验检测奶牛布氏杆菌病抗体，评估感染情况。并根据检测结果提出奶牛口蹄疫和布氏杆菌病防控建议。

2. 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 血清样品：311份血清样品采自体系所属的2个综合试验站和4个区域推广站，其中奶牛血清80份，奶水牛血清231份（见表1）。

2.1.2 口蹄疫免疫抗体检测试剂盒：中国农业科学院兰州兽医研究所口蹄疫液相阻断ELISA诊断试剂盒，口蹄疫A型抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,批号2009103003；亚洲I型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,批号2009110302；O型口蹄疫抗体液相阻断ELISA检测试剂盒,批号2010053101。

2.1.3  口蹄疫3ABC抗体检测试剂盒：瑞典Svanova公司口蹄疫3ABC抗体检测试剂盒，批号10-2800-10。

2.1.4 布氏杆菌病检测试剂盒：牛羊布病抗体检测试剂盒为IDEXX生产牛布氏杆菌抗体检测试剂盒，产品批号：220-T271。

2.2  方法

2.2.1 免疫抗体检测：口蹄疫A型、亚洲I型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法按照试剂盒说明书进行，结果判定标准以病毒抗原对照平均OD492nm值的50%为临界值，被检血清稀释孔OD492nm值大于临界值的孔为阴性孔，小于或等于临界值的孔为阳性孔。

2.2.2 3ABC抗体检测：口蹄疫3ABC抗体检测方法按照试剂盒说明书进行；结果判定标准：OD校正值=ODNSP 3ABC值-OD对照值；阳性百分比（PP）=样品OD校正值/阳性对照OD校正值×100。当阳性对照的OD校正值大于0.8且阴性对照的OD校正值小于0.3时试验数据有效。PP值<48，结果判定为阴性。PP值≥48，结果判定为阳性。

2.2.3 布氏杆菌病检测：布氏杆菌病抗体检测方法按照美国IDEXX牛布氏杆菌抗体检测试剂盒说明进行，检测结果判定方法如下：

计算值%=（OD样品-OD阴性）／（OD阳性-OD阴性）×100%

判定标准:计算值%≥80%为阳性,计算值＜80%为阴性

    3.结果

3.1 免疫抗体检测

应用口蹄疫A型、亚洲I型和O型免疫抗体液相阻断ELISA检测方法检测奶牛、奶水牛血清样品311份, 口蹄疫O型阳性数253份，阳性率81.35%；亚洲1型阳性数278份，阳性率89.39%；A型抗体阳性数110份，阳性率35.37%（表1）。

如果将所检测的血清样品按照奶水牛和奶牛分类, 检测奶水牛血清样品231份, 口蹄疫O型阳性数210份，阳性率90.91%；亚洲1型阳性数219份，阳性率94.81%；A型抗体阳性数91份，阳性率39.39%。检测奶牛血清样品80份, 口蹄疫O型阳性数43份，阳性率53.75%；亚洲1型阳性数59份，阳性率73.75%；A型抗体阳性数19份，阳性率23.75%。

3.2  3ABC抗体检测

应用口蹄疫3ABC抗体检测方法检测奶牛血清样品80份,检出阳性样品6份，阳性率7.50%；检测奶水牛血清样品231份,检出阳性样品1份，阳性率0.43%；合计检测奶牛和奶水牛血清样品311份,检出阳性样品7份，阳性率2.25%（表1）。

3.3  布氏杆菌病检测

应用IDEXX牛布氏杆菌抗体检测方法检测奶牛血清样品80份,检出阳性样品数为0，检测奶水牛血清样品231份,检出阳性样品2份，阳性率0.87%；合计检测奶牛和奶水牛血清样品311份,检出阳性样品2份，阳性率0.64%（表1）。

    4. 讨论

4.1 口蹄疫免疫抗体

本次血清学监测结果显示，所检测的奶牛和奶水牛血清样品口蹄疫O型阳性率81.35%，亚洲1型阳性率89.39%，A型阳性率35.37%。其中，口蹄疫O型阳性率和亚洲1型阳性率已达到国家规定的免疫合格率标准。在检测结果中，奶牛口蹄疫O型阳性率和亚洲1型阳性率显著低于奶水牛，局部采样地点阳性率偏低，这可能与采集样品时奶牛血清样品多数来自犊牛有关。总体上，经过多年实施的口蹄疫O型和亚洲1型强制免疫，取得了较好的免疫效果。

而A型口蹄疫抗体阳性率仅为35.37%，所检测奶（水）牛群体仍然为高度易感，防控应当以实施生物安全措施为主。A型口蹄疫抗体阳性率偏低的原因，可能与实施的免疫措施、所选用疫苗质量、以及实施强制免疫年限较短等有关，具体的原因仍需要进一步研究探索。

4.2  口蹄疫3ABC抗体

在本次口蹄疫3ABC抗体检测中，检测奶牛血清样品80份,检出阳性样品6份，阳性率7.50%，阳性样品分布在2个规模养殖场，阳性样品数分别为1份和5份。检测奶水牛血清样品231份,检出阳性样品1份，阳性率0.43%。合计检测奶牛和奶水牛血清样品311份,检出阳性样品7份，阳性率2.25%，分别分布在3个养殖场。

一般认为，口蹄疫3ABC抗体是由口蹄疫病毒在复制的过程中所产生的非结构蛋白所诱导的，因而，口蹄疫3ABC抗体阳性可能是自然感染的结果。但有证据显示，如果所使用的疫苗纯度较差，则可能包含非结构蛋白，进而导致因疫苗免疫而出现的3ABC阳性。

4.3 布氏杆菌病抗体

检测奶牛血清样品80份,检出阳性样品数为0，检测奶水牛血清样品231份,检出阳性样品2份，阳性率0.87%，且仅分布在1个养殖场。本次检测所得到的阳性率远低于相关报导，分析其原因包括：（1）云南非布氏杆菌病严重省份，布氏杆菌病呈高度散发，是可防可控的；（2）多年来实施严格检测和净化措施，即实施严格检疫，血清学阳性者一律扑杀，取得较好的防控效果。

    5. 防控措施

针对本次实施的口蹄疫和布氏杆菌病血清学监测结果，提出了相应的防控措施，并要求在各综合试验站和区域推广站奶（水）牛养殖场实施推广，所采取的措施主要包括如下几个方面。

5.1 强化奶牛和奶水牛犊牛免疫  

宏观上我国实施的口蹄疫强制免疫计划是每年春秋2次免疫，但对于奶（水）牛规模养殖场，需要强化犊牛免疫工作，最大限度地减少免疫空白期。因此需要对犊牛实施非季度性的补免，以提高免疫抗体阳性率水平，预防口蹄疫在处于免疫空白期内的犊牛群中发生。

5.2 跟踪监测  

本次实施的血清学监测，引入和应用奶（水）牛个体识别体系，所采集的样品的奶（水）牛个体可追溯。对于口蹄疫3ABC抗体阳性牛和布氏杆菌病抗体阳性牛实施个体跟踪调查，采取了隔离、病史调查、血清学监测结果验证和病原学检测。

5.3 完善生物安全措施

要求体系各综合试验站和区域推广站对所属的奶（水）牛养殖场完善生物安全措施建设，并由体系奶牛疫病实验室提供技术支持，具体的防疫技术措施包括：门卫消毒制度、日常防疫制度、免疫与监测、病牛隔离治疗、新引入牛隔离检疫措施。