昆明市某奶牛养殖小区乳房炎病原菌
昆明市某奶牛养殖小区乳房炎病原菌
分离和药敏试验
刘琴1曾广厅1 谢丽韫1 张任华1 李惠琼1 李建华2
（1. 昆明市动物卫生监督所，云南，昆明 650041；2.安宁市畜牧兽医站，云南，安宁 650300；）
摘要：采集了某奶牛养殖小区患临床型乳房炎的6头奶牛的患病乳区乳样，进行了细菌分离、纯化和药敏实验。结果6个样品分离到可疑菌株28株，其中葡萄球菌16株、链球菌5株、双球菌6株、大肠杆菌1株。具有溶血现象即有致病性的菌株9株，其中链球菌4株，4株葡萄球菌和1株双球菌。药敏实验结果显示：丁胺卡那、头孢哌酮、头孢噻肟具有良好的抑菌效果。
关键词：奶牛；乳房炎；细菌分离；药敏实验
    奶牛乳房炎是目前危害奶牛养殖业的主要疾病之一，每年可造成巨大的经济损失，据调查世界各地奶牛有1/3患各种类型的乳房炎。奶牛乳房炎的病原具有多样性，目前已分离到与奶牛乳房炎有关的病原微生物共有150多种，有细菌、真菌、霉形体、病毒和原囊藻类生物等。虽然有多种病原微生物可引起奶牛乳房炎，但国内外公认的最常见、最主要的病原为金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、停乳链球菌和大肠杆菌等肠杆菌。受昆明市某奶牛养殖小区的委托，昆明市动物卫生监督所对其场内临床型乳房炎进行病原菌分离和药敏实验，以期对其治疗提供指导。现将其报告如下。
    1. 材料
    普通琼脂培养基、血琼脂培养基、M-H培养基、革兰氏染色液、药敏纸片（康泰生物公司产品）：林可霉素（M124）、头孢噻肟（NA16）、头孢哌酮（NA08）、氨苄西林（NA11）、链霉素（M125）、丁胺卡那（NA11）。
    选取场内有临床症状的奶牛6头，无菌采集患病乳区乳样6个。
    2 试验方法
    2.1 样本采集
    牛只按常规挤奶消毒后，再用酒精棉球消毒乳头和采样者手指。每个乳头挤去头2～3把乳后无菌取乳样约5mL，盛于灭菌青霉素瓶内贴好标签，并于4h内送检。
    2.2 细菌分离培养
   将乳样分别划线接种于普通琼脂培养基，置37％温箱培养24h后观察菌落形态特征，挑取典型菌落涂片，革兰氏染色，镜检。根据菌体形态及染色特性初步判定细菌类属，并进一步用血琼脂培养基纯化培养。
    2.3 药敏试验
    药敏试验采用纸片扩散法，即用灭菌棉拭子蘸取纯培养菌液（浊度为0.5）均匀涂布在M-H平板上，加盖后放置10 min 左右，待平板面稍干，用镊子将药敏纸片平放在琼脂平板上，并轻压使其紧贴平板表面。将贴好纸片的平板37℃培养24 h，观察结果，测量抑菌圈直径（包括药敏纸片直径），计算同一类菌不同菌株的平均抑菌直径。直径小于1.6cm 为不敏感。1.6～2.0cm 为中度敏感，大于2.0cm 为高度敏感
    3 结果
    3.1 细菌培养、染色特性
    经培养和染色形态观察，6份乳样确定分离到可疑菌株28株，其中葡萄球菌16株、链球菌5株、双球菌6株、大肠杆菌1株。具有溶血现象即有致病性的菌株9株，其中链球菌4株，革兰氏染色阳性，菌落为露滴状，圆形、隆起、半透明，呈α、β或γ溶血，染色镜检形态一致，呈双或短链状、长链状排列；4株金黄色葡萄球菌，革兰氏染色阳性、平板上菌落较厚、灰白或灰黄色、有光泽、圆形、隆起、不透明，血平板菌落周围形成透明的溶血环。双球菌1株，形态与链球菌菌落相似，呈α溶血。由此看出，该场乳房炎病原菌主要为链球菌、金黄色葡萄球菌混合，其次为双球菌。
    3.2 药敏试验结果
    对全部28株细菌进行药敏试验，结果见表1。大部分菌株已对常用的抗生素氨苄西林、林可霉素有很强的耐药性。葡萄球菌对丁胺卡那、头孢哌酮、头孢噻肟高度敏感，对链霉素、氨苄西林、林可霉素不敏感。链球菌对丁胺卡那、头孢噻肟高度敏感、链霉素高度敏感，对头孢哌酮中度敏感，对氨苄西林、林可霉素不敏感。大肠杆菌对6种抗生素都不敏感。双球菌对氨苄西林、丁胺卡那、头孢噻肟、头孢哌酮高度敏感，对链霉素和林可霉素不敏感。
      表1    全部菌株药敏试验结果（抑菌圈）      单位：cm
序号
细菌
链霉素
氨苄西林
丁胺卡那
头孢噻肟
头孢哌酮
林可霉素
1
大肠杆菌
0　
0
1.3　
1
1
0
2
链球菌
1.3
0.3　
1.8
2.1
1.4
0
3
链球菌
2
0
1.6　
2.4
1.6　
1.3
4
链球菌
2.3
1.2　
2.9
2.6
1.3　
0
5
链球菌
2
1.5
2.4
1.9　
2
0
6
链球菌
2.3
4
2.2
3.9
2.0　
0.2　
平均值
 
2.0
1.4
2.2
2.6
1.7
0.3
7
葡萄球菌
0.8
0
2.5
2.6　
1.5
0
8
葡萄球菌
0
3.5
3.3
3.8
4
0
9
葡萄球菌
0
1
2.1　
0
2.5　
0
10
葡萄球菌
0.7
1.5　
3
0
2.4　
0.8
11
葡萄球菌
0.4
2.5
2.6
2.7
2.5
0
12
葡萄球菌
0
1.8　
3.1
0
2
0
13
葡萄球菌
0
1.6
2.3
2
2.1
0
14
葡萄球菌
1.1
1.0　
2.3
3.2
2.0　
0
15
葡萄球菌
0.9
1.4
2.8
2.1　
1.9
0
16
葡萄球菌
0.7
1.6　
2.4
1.6
1.9
0.7
17
葡萄球菌
2.1
3.7
2.4　
3.4
3.5
1.4
18
葡萄球菌
0
0.9
2.3
4
3.6　
0
19
葡萄球菌
0
0
2.9
2.6
1.6
0
20
葡萄球菌
1.5
2.5
2.2
2.1
2.5
0
21
葡萄球菌
0
0.9
2.3
1.7
2.2
1.2
22
葡萄球菌
0
0.7
1.9
1.9
2.1
0
平均
 
0.5
1.5
2.5
2.1
2.4
0.3
23
双球菌
0.3
0
1.6
0
0
0.3
24
双球菌
0.7
2
1.6
3
2.5　
0
25
双球菌
2.3
3.3
2.2
2.8
3.5
0.5
26
双球菌
0.6
3
1.9　
3.6
3.5
0
27
双球菌
0
3.6
2.5
2.9
3.6
0
28
双球菌
0.7
0.8
2.8
3.9
1.9
0.2
平均值
 
0.8
2.1
2.1
2.7
2.5
0.2
       表2 溶血性菌株药敏试验结果（抑菌圈）    单位：cm
序号
细菌
链霉素
氨苄西林
丁胺卡那
头孢噻肟
头孢哌酮
林可霉素
1
链球菌
2
0
1.6
2.4
1.6
1.3
2
链球菌
2.3
1.2
2.9
2.6
1.3
0
3
链球菌
2
1.5
2.4
1.9
2
0
4
链球菌
2.3
4
2.2
3.9
2
0.2
平均值
　
2.2
1.7
2.3
2.7
1.7
0.4
5
葡萄球菌
0
1.6
2.3
2
2.1
0
6
葡萄球菌
0.7
1.5
3
0
2.4
0.8
7
葡萄球菌
0
0.7
1.9
1.9
2.1
0
8
葡萄球菌
0
0.9
2.3
1.7
2.2
1.2
平均值　
　
0.2
1.2
2.4
1.4
2.2
0.5
9
双球菌
0.6
3
1.9
3.6
3.5
0
    4 结论与讨论
    4.1 通过对该小区牛乳的采样检测，发现该区引起乳房炎的病原菌主要为链球菌和葡萄球，菌其次为双球菌。奶牛乳房炎主要与环境卫生和挤奶操作有关，为了预防此病的发生，要切实加强牛舍的环境卫生管理，要定期对环境进行消毒，避免疾病的互相传播。挤奶操作熟练，严格按照操作规程进行操作，每头牛要固定一条毛巾，洗涤后用干净毛巾擦干乳房。挤奶器每次用后均要清洗消毒，防止挤奶设备对牛的交叉感染。
    4.2 要加强对隐形乳房炎监测。大多数养殖场（小区）已参加了DHI测定，牛场要高度重视DHI牧场管理报告的应用，对体细胞数超过50万甚至是20万的奶牛要进行隐形乳房炎监测，积极干预，避免发展成为临床型乳房炎，争取在干奶期进行治疗，保证下一个泌乳期乳房健康。
    4.3 经对药敏实验结果的综合分析，确定选用丁胺卡那、链霉素、头孢哌酮、头孢噻肟为主选药。引起乳房炎的主要病原菌对氨苄西林、林可霉素已有很强的耐药性。随着新的抗菌药物的广泛使用，将会面临新的耐药性的问题。因此有必要在给药途径、药物配合使用上做进一步的研究，以达到有效控制本病的目的。
    4.4  为及时给养殖户予以用药指导，本次实验尚未进行生化鉴定和其他抗生素的药敏实验，未确定细菌分型和其他抗生素的药敏效果。下一步将继续对分离的细菌进行分型和更多种类抗生素药敏效果实验。